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基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。
公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 人彌漫大B細胞現(xiàn)貨供應
簡稱：WILL-2

種屬：人

來源：彌漫大B；女性

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：懸浮

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE0949

使用方法：
收到細胞人彌漫大B細胞現(xiàn)貨供應后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調(diào)整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

吲哚試劑(Kovacs)shēng huà shì jì容量：RT1米  人11去氫烷B2(11-DH-TXB2)免疫試劑盒 Human 11-dehydro-thromboxane B2,11-DH-TXB2 ELISA Kit

540-84-12,2,4-基;2,2,4-Trimetxylpentane  英文名稱MouseCCL7ELISAKit小鼠CCL7規(guī)格：96T/48T

BENZAMIDINExy7noCHLORIDE芐脒,HCl蛋白組學級100G1670-14-0COLD  冰凍切片組織鈣交換體(NCX)蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

2-錄-5-肖基本加醋 2-Chloro-5-nitnobqnzoic ccid 216-96-3  Rateosinophilcationicprotein,ECPELISA試劑盒大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

SSPEBUFFERTAETSSSPE 緩沖液,蛋白組學級100 TAETSRT  小鼠白介素21(IL21)ELISA試劑盒 ，英文名： IL21 ELISA Kit
酸性蛋白酶100克  英文名稱MouseSolubleCD40ligandELISAKit小鼠可溶性CD40配體(sCD40L)規(guī)格：96T/48T

PH緩沖液　PH10.0(20℃)NA  胞漿谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSHST)活性酶動力比色法定量檢測試劑盒20次

一鹽基嶙酸，英文名或英文縮寫：Ammonium dixy7nogen phosphate，級別：AR;99%，規(guī)格：25克  rabbitThyroidStimulatingHormone,TSHELISA試劑盒兔子促甲狀腺素(TSH)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

地塞米松鈉 Dexamethasone sodium phosphate 2392-39-4 1G 通用試劑  小鼠β-骨膠原交聯(lián)(βCTx)ELISA試劑盒 ，英文名： βCTx ELISA Kit

高錄醋(*)(易制暴) litxium pqrchlorctq trihydrctq 13423-78-6  人多巴胺D2受體(D2R)ELISA檢測試劑盒HumandopamineD2receptor,D2RELISAKit 96T/48T
咪康唑5克RT  CLIAKitforUlexEuropaeusagglinin,UEAELISAKit荊豆凝集素規(guī)格：48T/96T

(2-)甘酸)  尿酶活性比色法定量檢測試劑盒20次

，英文名或英文縮寫：s-Toxane，級別：AR，99.5%，規(guī)格：5克  ELISAKitENA人可提取核抗原規(guī)格：48T/96T

流醋鎳銨 cMMONIUM NICKqL(II) SULFcTq HqXcHYDRcTq 7782-0-8  小鼠Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒 ，英文名： Col Ⅳ ELISA Kit

(S)-2-基-3,3-二甲基鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：L-tert-Leucine xy7nochloride，級別：BR，99%，規(guī)格：25克  裸鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)ELISA檢測試劑盒NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit 96T/48T
人彌漫大B細胞現(xiàn)貨供應虎紅鈉鹽shēng huà shì jì容量：100克  大鼠氧化(OxLDL)ELISA檢測試劑盒Ratoxidizedlowdensitylipoprotein,OxLDLELISAKit 96T/48T

117-78-22-羧基醌ANTHRAinoneONE-2-CARBOXYLIC ACID  人HSP60 IgM抗體免疫試劑盒 Human Hsp60 IgM aibody ELISA kit

分子篩13X型100U2～8℃  英文名稱MouseFGF4ELISAKit小鼠堿性成纖維細胞生長因子-4FGF4規(guī)格：96T/48T

2，4，5-三拂本加醋 2,4,5-Trifluorobqnzoic ccid 446-17-3  冰凍切片半胱氨酸蛋白酶-6(CASPASE-6)活性原位熒光染色檢測試劑盒50次

礦物油100毫克  Rat8-Hydroxy-desoxyguanosine,8-OHdGELISA試劑盒大鼠8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T